饮料中胭脂红检测的固相萃取方法

(Polyclean X- WAX)

一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC 法作为分析方法，检测饮料中着色剂的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物

胭脂红(CAS:569-64-2)。

三、应用范围

本方法适用于饮料中合成着色剂的检测的 HPLC 检测及确证。

四、参考标准

《GB/T 21916-2008 水果罐头中合成着色剂的测定》。

五、实验材料

Polyclean X-WAX 固相萃取柱 60mg/3mL(Cat.No. 9B-P005-03060)。

六、实验方法1、样品提取

准确称取样品 5.0 g 于 50 mL 离心管中，超声波振荡提取 5 min， 涡旋 1 min，4000

r/min 离心 5 min，上清液转移至 50 mL 离心管中,用水定容至 5 mL。

2、SPE 柱活化

Polyclean X-WAX 固相萃取柱使用前用 2 mL 甲醇、2mL 水活化 。3、上样和淋洗

在 Polyclean X-WAX 萃取柱上加入 5 mL 待净化样品，收集流出液，然后用 2 mL 水、

2 mL5%氨化甲醇淋洗。

4、洗脱

用 4 mL 37%盐酸-乙醇（1:19,v/v）进行洗脱，控制流速 1 mL/min，收集洗脱液。

5、重新溶解

流出液 60 ℃减压至干，加 1 mL 水定容，混匀，过 0.45 μm 滤膜，待上机测试。

5、HPLC 条件
设    备 ：Waters Alliance 2690
色谱柱 ：Neptune C18 (4.6×250 mm,5 μm)
检测器 ：Waters 2487 紫外检测器
流动相：A：甲醇         B：0.02 mol/L 乙酸铵缓冲溶液
洗脱方式：梯度洗脱

表 1 梯度洗脱条件

时间/min	A%	B%
--	5	95
10.00	20	80
18.00	60	40
25.00	60	40
25.10	5	95
40.00	5	95

流速：1.0 mL/min
检测波长：509 nm
进样体积:20 μL

七、实验结果

1、5 mg/kg 饮料中胭脂红的添加回收结果