食品中喹诺酮检测的固相萃取方法
（PolyClean X-HLB）
一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为检测手段。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
依诺沙星(CAS:74011-58-8)，恩诺沙星(CAS:93106-60-6)，培氟沙星(CAS:70458-95-6)， 丹诺沙星(CAS:119478-55-6)
三、应用范围
本方法适用于食品中喹诺酮的HPLC检测及确证。
四、参考标准
《GB/T 21312-2007动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法》
五、实验材料
NuAnalyticalPolyCleanX-HLB固相萃取柱200mg/6mL。
六、实验方法
1、 样品待测溶液制备
称取均质牛奶试样5.0 g试样(精确至0.001g)于50 mL离心管中，加入20 mLEDTA-Mellvaine缓冲溶液，1000r/min涡旋混合1min，超声提取10min，10000r/min离心5 min(温度低于5 ℃)，提取三次合并上清液。
2、活化
依次用6 mL甲醇和6 mL水活化。
3、上样和洗脱
将提取液以2 mL/min的速度过柱，弃去滤液，用2 mL5%甲醇水溶液淋洗，弃去淋洗
液，将小柱抽干，再用6 mL甲醇洗脱并收集洗脱液。
4、重新溶解
50℃缓慢氮气流条件下吹至近干，用1 mL 0.2 %甲酸水溶液溶解。1000 r/min涡旋混合1 min，经0.45 µm有机滤膜过滤，供HPLC测定。
5、HPLC条件
色谱柱：SuperLu C18 (250×4.6mm，5μm)
检测器：UV@254 nm
流动相：A: 乙腈 B:0.1%甲酸的水溶液
柱温：室温
流速：1.0mL/min
进样量：20μL
洗脱方式：梯度洗脱，洗脱程序如下：
|
时间/min |
A/% |
B/% |
|
0.00 |
9 |
91 |
|
11 |
9 |
91 |
|
20 |
29 |
71 |
|
25 |
37 |
63 |
|
26 |
100 |
0 |
|
30 |
100 |
0 |
|
31 |
9 |
91 |
|
36 |
9 |
91 |
七、实验结果
1、1mg/kg牛奶基质中喹诺酮的添加回收结果
表1 1mg/kg牛奶基质中喹诺酮的添加回收结果
|
名称 |
平均回收率（%） |
|
依诺沙星 |
92.8 |
|
丹诺沙星 |
82.4 |
|
培氟沙星 |
93.8 |
|
恩诺沙星 |
81.2 |
2、添加水平为1mg/kg牛奶基质中喹诺酮检测色谱图
图1 添加水平为1mg/kg牛奶基质中喹诺酮检测色谱图
