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牛奶中氢化可的松检测的固相萃取方法
（SuperClean Silica）
一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品前处理方法，HPLC 法作为检测手段。该方法操作方便， 可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用。
二、实验目标物
氢化可的松(CAS:50-23-7)
三、应用范围
本方法适用于牛奶中氢化可的松的检测及确证。
四、实验材料
NuAnalytical SuperClean Silica 固相萃取柱 500 mg/6 mL。
1、 样品待测溶液制
称取牛奶试料 5 g 于 50 mL 离心管中，加 30 mL 乙酸乙酯，均质 1 min，350 r/min 摇床振动 20 min，4200 r/min 离心 10 min，移取乙酸乙酯层。残渣中加乙酸乙酯 25 mL，均质 1 min， 350 r/min 摇床振动 20 min，4200 r/min 离心 10 min，移取乙酸乙酯层。合并两次提取液，40 ℃旋转至近干，加乙酸乙酯 1 mL 和正己烷 5 mL，溶解残渣，待净化。
2、活化
用 6 mL 正己烷活化Silica 固相萃取柱。
3、上样和洗脱
取待测液，通过 Silica 固相萃取小柱富集，弃去流出液。用 6 mL 正己烷淋洗固相萃取柱，真空抽干 5 min，弃去流出液。用 6 mL 正己烷-丙酮(6:4, v/v)洗脱萃取柱，收集洗脱液。
4、重新溶解
洗脱液于 40 ℃氮气吹干，加 20%乙腈水溶液 2.0 mL 溶解残余物，过 0.22 μm 滤膜，供HPLC 测定。
5、HPLC 条件
色谱柱：SuperLu C18 (250×4.6mm，5μm)
检测器：UV@254 nm
流动相：A：乙腈 B：0.1%甲酸水溶液
柱温：室温
流速：1.0 mL/min
进样量：20 μL
洗脱方式：梯度洗脱，洗脱程序如下：
|
时间/min |
A/% |
B/% |
|
0 |
20 |
80 |
|
15 |
40 |
60 |
|
15.1 |
90 |
10 |
|
19 |
90 |
10 |
|
19.1 |
20 |
80 |
|
21.1 |
20 |
80 |
六、实验结果
1、 牛奶中氢化可的松的 1mg/kg 添加回收结果
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2、添加水平为 1mg/kg 牛奶中氢化可的松检测色谱图
图 1 添加水平为 1mg/kg 牛奶中氢化可的松检测色谱图
