牛奶中氯霉素检测的固相萃取方法

（SuperClean C18）

一、实验目的

本研究利用固相萃取作为样品前处理方法，HPLC 作为分析方法，检测牛奶样品中的氯霉素残留水平。该方法操作简便，可简化样品前处理过程，减少有机溶剂的使用。

二、实验目标物

氯霉素(CAS:56-75-7)

三、应用范围

本方法适用于动物源性食品中氯霉素的检测的 HPLC 检测及确证。

四、参考标准

《GB/T 22338-2008 动物源食品中氯霉素类药物残留量测定》

五、实验材料

NuAnalytical SuperClean C18 固相萃取柱 500mg/6mL。

六、实验方法

1、 样品待测溶液制备

准确称取牛奶 5 g(精确到 0.001 g)，加入乙酸乙酯 15 mL，涡旋振荡 1 min，摇床振荡10 min。3000 r/min 转速离心 10 min。将上清液转移至试管中，于 45  ℃氮吹吹干，用 5 mL乙腈-水溶液(5:95, v/v)溶解，待净化。

2、活化

依次用 5  mL 甲醇和 5  mL 水活化。

3、上样和洗脱

将待净化液加入已活化好的固相萃取柱中，以 1  mL/min 的流速过柱，弃去滤液。用 2×4 mL 乙腈-水溶液(5:95, v/v)淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，抽干 10 min。用 8 mL 乙酸乙酯洗脱固相萃取柱，收集洗脱液。

4、重新溶解

洗脱液于 45 ℃氮气吹干，用 1 mL 乙腈-水溶液(2:8, v/v)定溶，0.22 μm 微孔滤膜过滤， 供 HPLC 测定。

5、HPLC 条件

色谱柱：SuperLu C18 (250×4.6mm，5μm)

检测器：UV@268 nm

流动相：A:水      B:甲醇

洗脱方式：等度洗脱，A:B=40 : 60

柱温：室温    

 流速：1.0 mL/min            

进样量：20μL

七、实验结果

1、牛奶基质中氯霉素的 0.5mg/kg 添加回收结果

名称   1   2   3 平均回收率（%） RSD（%） 氯霉素 97.1 99.7 100.2 99 1.68 表 1 牛奶基质中氯霉素的 0.5mg/kg 添加回收结果回收率（%）

 

 2、添加水平为 0.5mg/kg 牛奶基质中氯霉素检测色谱图

图 1    添加水平为 0.5mg/kg 牛奶基质中氯霉素检测色谱图