APP ID NO. : FLM-S170008
普洱中农药多残留检测的固相萃取方法
（SuperClean GCB/NH2）
一、实验目的
本研究利用固相萃取作为样品前处理方法，GC-ECD 和 LC-MS/MS 作为分析方法，检测普洱中的农药残留水平。
该方法操作简便，可简化样品前处理过程，减少有机溶剂的使用。
二、应用范围
本方法适用于茶叶中有机磷类、有机氯类、拟除虫菊酯类和氨基甲酸酯类农药多残留的测定。
三、实验材料
NuAnalytical SuperClean GCB/NH2 固相萃取柱 500 mg/500 mg/6 mL。
四、实验方法
1、样品提取
称取粉碎好的普洱 2 g(精确到 0.001 g)，加入 50 mL 离心管中，加入 10 mL 乙腈，剧烈振荡 1 min，静置 30min，4000 r/min 离心 5 min。上清液待净化。
2、SPE柱活化
GCB/NH2 固相萃取柱中加入约 2 cm 高无水硫酸钠，使用前使用 10 mL 乙腈-甲苯(3:1，v/v)活化。
3、上样和洗脱
当溶液液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液 4 mL, 用鸡心瓶接收流出液，逐步加入 25 mL 乙腈-甲苯(3:1，v/v)洗涤小柱，收集上述所有流出液于鸡心瓶中。
4、重新溶解
流出液于 40 ℃水浴中旋蒸至 1 mL 左右，加入 2 mL 乙腈转移至 10 mL 试管中，于40 ℃下氮气吹干，加入 1 mL 乙腈溶解残渣，0.22 μm 微孔滤膜过滤，分别供 GC-ECD 和LC-MS/MS 上机测试。
5、仪器条件
（1）、 GC-ECD 条件
气相仪器：Agilent 7890A
色谱柱：FB-5, 30 m×0.32 mm, 0.25 μm
进样口温度：220 ℃
检测器温度：300 ℃
升温程序：180 ℃(保持 2 min)；以 10 ℃/min 升温到 230 ℃(保持 2 min)；以 2 ℃/min
升温到 260 ℃(保持 2 min)；以 25 ℃/min 升温到 270 ℃(保持 1.6 min)
载气：氦气
流速：1.6 mL/min
进样方式：分流进样（分流比 10:1）
（2）、LC-MS/MS 条件
质谱仪：API 4000
色谱柱：SuperLu C18(2.0 mm×150 mm, 5 μm)
流动相：A: 0.1%甲酸+10 mM 乙酸铵(1 mL 甲酸+0.77 g 乙酸铵溶于 1 L 水中)；B: 甲醇
洗脱方式：梯度洗脱，洗脱程序如下：
时间/min
A(%)
B(%)
0.0
95
5
1.50
95
5
6.0
5
95
11.0
5
95
11.01
95
5
15
95
5
流速：0.35 mL/min
柱温： 40 ℃
进样体积：5 μL
离子源：电喷雾(ESI)
扫描模式：正离子模式
检测方式：多反应监测(MRM) 质谱仪离子源参数如下：
|
Source/Gas |
|
|
Collision Gas (CAD) |
6 |
|
Curtain Gas (CUR) |
12 |
|
Ion Source Gas 1 (GS1) |
50 |
|
Ion Source Gas 2 (GS2) |
50 |
|
Ion Spray Voltage (IS) |
5500 |
|
Temperature (TEM) |
550 |
|
Interface Heater (IHE) |
ON |
|
物质名称 |
保留时间/min |
检测离子对 |
DP |
EP |
CE |
CXP |
|
涕灭威 |
7.06 |
208.1＞89.1
208.1＞116 |
30
30 |
10
10 |
22
10 |
12
12 |
|
克百威 |
7.13 |
222.3＞123.1
222.3＞165.2 |
48
48 |
10
10 |
16
31 |
12
12 |
|
涕灭威砜 |
6.25 |
223.1＞86.2
223.1＞148.4 |
69
69 |
10
10 |
21
13 |
12
12 |
|
涕灭威亚砜 |
6.10 |
207.1＞132.2
207.1＞89.1 |
60
60 |
10
10 |
13
22 |
12
12 |
|
啶虫脒 |
6.83 |
223.4＞126.1
223.4＞90 |
70
70 |
10
10 |
29
46 |
12
12 |
五、实验结果
1、普洱中农药多残留的添加回收结果
表 1 0.25 mg/kg 普洱中有机氯和拟除虫菊酯类农药多残留的添加回收结果
回收率（%）
名称
平均回收率（%）
RSD
(%)
1
2
3
乙烯菌核利
84.5
76.0
80.0
80.2
5.30
腐霉利
110.5
102.0
105.0
105.8
4.07
异菌脲
112.0
107.5
119.0
112.8
5.14
联苯菊酯
94.5
87.5
90.5
90.8
3.87
甲氰菊酯
109.5
100.0
106.5
105.3
4.61
高效氟氯氰菊酯
84.0
79.5
82.5
82.0
2.79
氟氯氰菊酯
86.5
86.8
94.1
89.1
4.83
氟氰戊菊酯
120.5
114.0
120
119.2
3.06
氰戊菊酯
95.5
85.0
92.9
91.1
6.00
氟胺氰菊酯
70.4
72.75
81.0
74.7
7.45
表 1 0.05 mg/kg 普洱中氨基甲酸酯类农药多残留的添加回收结果
回收率（%）
名称
平均回收率（%）
RSD
(%)
1
2
3
涕灭威
95.6
87.2
90.0
90.9
4.70
克百威
84.4
78.0
82.2
81.5
3.99
涕灭威砜
77.4
83.0
81.4
80.6
3.58
涕灭威亚砜
70.0
74.4
75.2
73.1
3.73
啶虫脒
82.4
94.0
88.4
88.3
6.57
2、普洱中农药多残留检测色谱图
图 1 添加水平为 0.25 mg/kg 普洱中有机氯和拟除虫菊酯类农药多残留检测色谱图
图 2 添加水平为 0.0625 mg/kg 普洱中氨基甲酸酯类农药多残留检测色谱图
