饲料中苯甲酸检测的固相萃取方法

（PolyClean X-MAX）

一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC 法作为分析方法，检测饲料中苯甲酸含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物

苯甲酸 (CAS:65-85-0)

三、应用范围

本方法适用于饲料中苯甲酸的检测的 HPLC 检测及确证。四、参考标准

《NY/T 2297-2012 饲料中苯甲酸和山梨酸的测定高效液相色谱法》五、实验材料

NuAnalytical PolyClean X-MAX 固相萃取柱 60 mg/3 mL。六、实验方法

1、 样品待测溶液制备

准确称取饲料样品 2.0 g 于 50 mL 离心管中，加入 2%  氨水水溶液（v/v）21 mL，超声

提取 10 min，振荡提取 10min，准确加入 0.25 mol/L 的亚铁氰化钾溶液 2 mL、1 mol/L 的乙酸锌溶液 2 mL，涡旋混匀。5000 r/min 离心 5min，取上清液 5 mL 转移至 25 mL 容量瓶中, 用 2%  氨水水溶液（v/v）定容至 25 mL，备用。

2、活化

依次用 3  mL 甲醇、3mL 水活化

3、上样和洗脱

将在MAX 固相萃取柱上加入5 mL 备用样品，弃去流出液；用3 mL 2 %氨水水溶液（v/v）、

3mL 甲醇淋洗，弃去淋洗液；抽干小柱；用 5 %甲酸甲醇溶液（v/v）2 mL 洗脱，收集洗脱液（整个上样、洗脱过程保持流速 1 mL/min）。

4、重新溶解

洗脱液过 0.45 μm 滤膜，供 HPLC 测定。

5、HPLC 条件

色谱柱：SuperLu C18 (250×4.6mm, 5μm)

检测器：Waters 2487  紫外双波长检测器；检测波长： 230nm

流动相 ：A：乙腈    B：磷酸盐缓冲溶液（磷酸二氢钾 2.5g+磷酸氢二钾 2.5 加水溶解定容到 1000mL）

洗脱方式：等度洗脱 A:B=10:90

流速：1.0 mL/min           进样体积:    20 μL