水产品中孔雀石绿检测的固相萃取方法
（SuperClean AL-N）
一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC 法作为分析方法，检测水产品中孔雀石绿含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
孔雀石绿(CAS:569-64-2)
三、应用范围
本方法适用于鲜活水产品中孔雀石绿的检测的 HPLC 检测及确证。四、参考标准
《GB/T 19857-2005 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》五、实验材料
NuAnalytical SuperClean Alumina-N 固相萃取柱 1000mg/3mL。六、实验方法
1、 样品待测溶液制备
准确称取鱼肉样品 5.0 g 于 50 mL 离心管中，加入 10 mL 乙腈，超声波振荡提取 5 m
in，涡旋 1 min，4000r/min 离心 5 min，上清液转移至 50 mL 离心管中,残渣按照上述步骤
重复提取一次；合并两次提取液，用乙腈定容至 25 mL。
2、活化
依次用 5 mL 乙腈活化
3、上样和洗脱
在中性氧化铝固相萃取柱上加入 5 mL 待净化样品，收集流出液，然后用 4 mL 乙腈洗脱，合并收集流出液。
4、重新溶解
流出液 45 ℃氮吹至近干，1 mL 乙腈定容，过 0.45 μm 滤膜，，供高效液相色谱测定。
5、HPLC 条件
色谱柱：SuperLu C18 (250×4.6mm, 5μm) 检测器：UV-Vis@618 nm
流动相：A-乙腈 B-0.05 mol/L 乙酸铵缓冲溶液
流速：1.2 mL/min 进样体积: 50 μL
洗脱方式：梯度洗脱，洗脱程序如下：
|
时间/min |
A/% |
B/% |
|
0.0 |
60 |
40 |
|
3.00 |
60 |
40 |
|
3.10 |
80 |
20 |
|
10.00 |
80 |
20 |
|
10.10 |
60 |
40 |
|
13.00 |
60 |
40 |
七、实验结果
1、0.5 mg/kg 鱼肉中孔雀石绿的添加回收结果
表 1 0.5 mg/kg 鱼肉中孔雀石绿的添加回收结果
名称
1
2
3
平均回收率（%）
RSD（%）
孔雀石绿
91.0
91.8
87.2
90.0
2.73
2、添加水平为 0.5 mg/kg 鱼肉中孔雀石绿检测的液相色谱图
图 1 添加水平为 0.5 mg/kg 鱼肉中孔雀石绿检测的液相色谱图
