动物源性食品中 β-受体激动剂检测的固相萃取方法
（PolyClean X-MCX）
一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为猪肉样品的前处理方法，LC-MS/MS 法作为检测手段。该方法可简化猪肉样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
五种 β-受体激动剂物质：克仑特罗(CAS:37148-27-9)，沙丁胺醇(CAS:18559-94-9)，莱克多巴胺(CAS:97825-25-7)，特布他林(CAS:23031-25-6)，妥布特罗(CAS:41570-61-0)。
三、应用范围
本方法适用于动物源性食品中β-受体激动剂 LC-MS/MS 检测及确证。
四、参考标准
《GB/T 21313-2007 动物源性食品中 β-受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法》
五、实验材料
NuAnalytical PolyClean X-MCX 固相萃取柱 200 mg/6 mL。
六、实验方法
1、 样品待测溶液制备
称取均质猪肉试样 10.0ｇ试样（精确至 0.01 g），加入 15 mL pH 5.2 的乙酸-乙酸铵缓冲溶液，1000 r/min 匀浆 1min，再加入β-葡萄糖醛酸苷肽酶/芳香磺酸酯酶溶液 100 µL， 于 37 ℃±1 ℃振荡酶解过夜。取出冷却后，10 ℃9500 r/min 离心 10 min。取全部上清液。待净化。
2、活化
加入 6 mL 甲醇、6mL 水、6mL 0.1mmol/L 高氯酸(pH 4.0)溶液活化。
3、上样和洗脱
当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，过柱，弃去滤液，用 2
mL 甲醇、2 mL 2%甲醇水溶液淋洗，最后用 7 mL5%氨化甲醇洗脱。
4、重新溶解
洗脱液缓慢氮气流条件下吹至近干，用甲醇-0.1%甲酸水溶液溶解定容至 1.0 mL，涡旋混匀 1 min，用于 LC-MS/MS 测定。。
5、LC-MS/MS 条件
质谱仪：API 4000 色谱柱：SuperLu C18(2.0 mm×150 mm, 5 μm)
流动相：A: 乙腈 B: 0.1%甲酸水溶液
流速：0.2 mL/min 柱温： 40 ℃ 进样体积：2 μL
离子源：电喷雾(ESI) 扫描模式：正离子模式 检测方式：多反应监测(MRM)
洗脱方式：梯度洗脱，洗脱程序如下：
|
时间/min |
A(%) |
B(%) |
|
0.00 |
5 |
95 |
|
4.00 |
50 |
50 |
|
6.00 |
10 |
90 |
|
8.00 |
95 |
5 |
|
8.01 |
5 |
95 |
|
12.00 |
5 |
95 |
质谱仪离子源参数如下：
|
Source/Gas |
|
|
Collision Gas (CAD) |
10 |
|
Curtain Gas (CUR) |
30 |
|
Ion Source Gas 1 (GS1) |
50 |
|
Ion Source Gas 2 (GS2) |
50 |
|
Ion Spray Voltage (IS) |
5500 |
|
Temperature (TEM) |
550 |
|
Interface Heater (IHE) |
ON |
ß-受体激动剂的母离子和子离子参数表：
|
物质名称 |
保留时间/min |
检测离子对 |
DP |
EP |
CE |
CXP |
|
特布他林 |
3.77 |
226.0/151.7
226.0/169.8 |
60
60 |
10
10 |
16
12 |
12
12 |
|
克伦特罗 |
5.82 |
227.1/202.9
227.1/259.0 |
60
60 |
10
10 |
23
15 |
12
12 |
|
莱克多巴胺 |
5.45 |
302.1/163.7
302.1/284.2 |
60
60 |
10
10 |
23
19 |
12
12 |
|
沙丁胺醇 |
3.86 |
240.1/147.8
240.1/221.9 |
60
60 |
10
10 |
18
12 |
12
12 |
|
妥布特罗 |
6.17 |
227.9/153.8
227.9/171.8 |
60
60 |
10
10 |
16
12 |
12
12 |
七、实验结果
1、0.5µg/kg 猪肉基质加标回收结果：
|
名称 |
1 |
回收率（%）
2 |
3 |
平均回收率（%） |
RSD（%） |
|
沙丁胺醇 |
88.62 |
88.79 |
81.45 |
84.29 |
4.52 |
|
克伦特罗 |
85.32 |
88.29 |
86.73 |
86.73 |
1.72 |
|
莱克多巴胺 |
86.56 |
88.33 |
81.36 |
85.42 |
4.24 |
|
特布他林 |
81.95 |
80.95 |
87.26 |
83.39 |
4.06 |
|
妥布特罗 |
82.64 |
82.56 |
88.14 |
84.45 |
3.79 |
2、添加水平为 0.5µg/kg 猪肉基质中β-受体激动剂检测色谱图
图 1 ß-受体激动剂待测物总离子流图 图 2 沙丁胺醇(sabutamal)(240.1/147.8)色谱图
图 3 克伦特罗(clenbutecol)(277.1/202.9)色谱图 图 4 莱克多巴胺(ractopamine)(302.1/163.7)色谱图
图 5 特布他林(terbutaline)(226.0/151.7)色谱图 图 6 妥布特罗(tulcbutclol)(227.9/153.8)色谱图
