使用C8和C18色谱柱时,需要避免高水相流动相,这主要是由于以下几个方面的原因:
### 一、固定相的非极性特性
* C8和C18色谱柱的固定相表面键合有C8或C18烷基链,这些烷基链具有类似油脂的非极性特性。在反相色谱法中,分析物在流动相和固定相之间进行分配以实现分离。由于固定相的非极性,它们通常适用于分析非极性或弱极性分析物。
### 二、高水相流动相的影响
1. **润湿性差**:
* 类似油脂的非极性特性使得C8或C18固定相在高比例水相中不能被有效润湿。流动相中的水分子由于具有较高的表面张力,往往只通过固定相孔之间的空间,而无法充分润湿孔内的固定相。
* 当流动相中有一定比例的有机溶剂(如乙腈或甲醇)时,这些溶剂对C8或C18固定相具有良好的润湿性,有助于分析物在色谱柱上的保留和分离。
2. **固定相塌陷**:
* 如果使用高比例的水相作为流动相,C8或C18固定相可能会因为表面脱水而塌陷,这种现象称为固定相塌陷、链折叠或固定相打结。固定相塌陷会导致保留时间减少和保留时间的不重复性,严重影响分离效果。
3. **色谱柱性能下降**:
* 高水相流动相还可能导致色谱柱上的样品残留增加,影响后续分析的准确性。此外,硅胶基质色谱柱的硅胶粒子在高水相环境中可能会发生溶解,导致色谱柱性能下降甚至损坏。
### 三、保留效果与分离效果
* 使用高比例水相流动相时,极性较强的化合物可能会与色谱柱之间的相互作用增强,导致拖尾现象增加,影响分离效果。
* 保留时间的减少和保留时间的不重复性也会使分析结果的可靠性降低。
### 四、替代方案与建议
* 如果需要使用水性或高比例水相的流动相,可以考虑选择其他类型的色谱柱,如未封端色谱柱、短链烷基色谱柱、极性嵌入烷基相色谱柱或宽孔径相色谱柱等。
* 在方法开发阶段,应仔细选择合适的色谱柱和流动相条件,以最大限度地提高化合物的分离效果和保护色谱柱免受损坏。
综上所述,使用C8和C18色谱柱时避免高水相流动相是为了保护色谱柱的固定相不受损害,确保分析结果的准确性和可靠性。