在HPLC(高效液相色谱)操作中,两种典型的错误操作包括:
1. **对流动相进行不必要的过滤**:通常,经过净化系统处理得到的HPLC级溶剂和水已经足够干净。如果再次进行额外的过滤,可能会引入不必要的化学污染。然而,当使用离子对试剂、低纯度缓冲剂或高盐含量的流动相时,或者当水源质量不佳导致净化系统流出的水不够干净时,仍需要对流动相进行过滤。
2. **使用不适当的色谱柱**:一种常见的错误是选择粒径为5µm的颗粒填充的色谱柱,尽管多年来这种规格的色谱柱一直作为标准使用。实际上,3µm粒径颗粒填装的色谱柱(150mm×4.6mm)具有更好的分离效果及更短的分析时间。然而,需要注意的是,3µm粒径颗粒填装的色谱柱的进口孔隙更小,更容易被“脏”的样品堵塞。另外,尽管4.6mm内径的色谱柱长期以来一直作为HPLC分析柱的“标准”,但在努力减少溶剂消耗和节约样品的目标下,许多实验室已经开始转向使用3.0mm内径的色谱柱。
为了避免这些错误,建议用户在使用HPLC时仔细阅读并遵循相关仪器和试剂的说明书,并根据实验条件和需求进行适当的调整和优化。同时,定期对仪器进行维护和保养,确保其在最佳状态下运行。