摘要:目的 结合外标法和面积归一化法,建立反相高效液相色谱法测定Fmoc-L-His(Trt)-OH 中的光学异构体Fmoc-D-His(Trt)-OH 的含量。
方法 采用Chiral MX(2)-RH 色谱柱(4.6 mm×250mm,5 μm);以乙腈- 水- 乙酸(500∶500∶1)为流动相,等度洗脱;流速为0.8 mL·min- 1;紫外检测器检测,波长为220 nm;柱温为30 ℃;进样体积为10 μL。结果 Fmoc-L-His(Trt)-OH 和
Fmoc-D-His(Trt)-OH 分离良好;Fmoc-D-His(Trt)-OH 在0.15 ~ 2.93 mg·mL- 1 与峰面积呈良好的线性关系(相关系数为0.9999);定量限为0.15 μg·mL- 1,检测限为0.049 μg·mL- 1。回收率在95% ~ 100% 内,RSD 为0.96%。结论 本方法操作简单,专属性强,灵敏度高,为Fmoc-L-His(Trt)-OH 中光学异构体Fmoc-D-His(Trt)-OH 研究提供参考。