高效液相色谱仪在使用中可能会遇到压力过高的问题。压力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。以下是排查和解决这类问题的步骤：
1. 断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下。如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，再检查。
2. 打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。处理方法是将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。如果压力降至100 PSI（6.7 Bar）以下，过滤白头正常，再检查。
3. 把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。处理方法是如果是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。
此外，影响系统压力的因素还有流动相的溶剂组成、温度及流速。具体来说：
1. 流动相的粘度是产生反压的主要原因。有机溶剂-水的粘度随组成与压力的关系图显示，乙腈-水比例为（20:80）、甲醇-水比例为（40:60至50:50）时，系统的压力最大。在做实验时应尽量避开这个比例范围。另外，异丙醇粘度大，一般不作流动相使用。
2. 流速对反压的影响是线性关系，流速增加，反压亦增大。
3. 温度对反压的影响是反比关系，温度升高，反压降低，对某些流动相的影响更大一些。
4. 液相色谱仪各模块之间的连接管路也会产生压力，系统压力与管路的长度成正比，与管路直径的四次方成反比（1/4d）。上述考虑的是柱外因素对系统压力的影响，色谱柱对系统压力的影响也很大，反压与色谱柱长度成正比，与填料颗粒度的平方成反比（2.5μm填料比3.5μm填料反压高）。
以上信息仅供参考，如遇到无法解决的问题建议联系专业技术人员寻求帮助或咨询液相色谱仪品牌厂商寻求解决方案。
