App ID: FLM-S230001
GB 5009.35-2023
食品中合成着色剂固相萃取及检测
一、实验目的
本研究按照 GB5009.35-2023 标准，利用固相萃取法作为样品的前处理，建立了固相萃取-高效液相色谱法测定食品中合成着色剂含量的方法， 样品经乙醇氨水提取后， 经 Polyclean X-WAX-S
150mg/6ml 小柱净化， 采用高效液相色谱仪结合紫外检测器测定。
二、实验目标物
糖果等食品中合成着色剂
三、应用范围
糖果等食品中合成着色剂的前处理与分析。
四、实验材料
菲罗门 Polyclean X-WAX-S 小柱, 150mg/6mL(货号：9B-P008-06150)。
注：乙醇氨水溶液配制，量取无水乙醇 700 mL，加入 4 mL 氨水，用水稀释并定容至 1 L，混匀。
五、实验方法
1、样品提取
准确称取样品 2 g（精确至 0.001 g），置于 50 mL 具塞离心管中，加入 25 mL 乙醇氨水溶液（硬糖需要
先加入 2 mL 水超声使其溶解），涡旋 1 min，50℃超声提取 20 min，8000 转/分钟离心 5 min。
取上清液置于 50 mL 离心管中，残渣中再加入 15 mL 乙醇氨水溶液重复提取 1 次，离心后合并上清液，
用乙醇氨水溶液定容至 50 mL，即得提取液。
准确吸取提取液 10 mL，50℃下氮气浓缩至 2 mL 左右，分 2~3 次共加入 10 mL 5%甲醇水溶液溶解，作为待净化液。
2、SPE 柱净化
先依次用 6 mL 甲醇和 6 mL 水活化 Polyclean X-WAX-S 150mg/6ml 固相萃取柱，保持柱体湿润，将待净化液注入柱中，控制流出液流速在 1 滴/秒，弃去流出液。再依次用 6 mL 2%甲酸水和 6 mL 甲醇淋洗， 弃去淋洗液，抽干小柱。
最后用 6 mL 2%氨化甲醇洗脱，分两次加入，收集洗脱液，于 50 ℃氮吹至近干。准确加入 2 mL pH=9 的乙酸铵溶液溶解，过 0.45 μm PTFE 滤膜，弃去 2~5 滴初滤液，取续滤液作为待测液。
3、HPLC 条件
色谱柱：菲罗门 SuperLu C18(2) 5u 250*4.6mm（货号：FMG-5292-EONU) 流动相：A：20 mmol/L 乙酸铵溶液 B：甲醇
色谱方法：参照 GB 5009.35-2023 标准中一致的方法
六、实验结果参考
七、注意事项
1）在使用乙醇氨水溶液提取时，需要提取两次以上，提取一次可能会导致提取不充分，导致回收率偏低。
2）过 Polyclean X-WAX-S 小柱前确认样液的 pH 值＜6，以便于合成着色剂目标化合物和填料更好的结合。
3）上机之前过滤所用的针式过滤器不能使用尼龙针式过滤器，会吸附部分合成着色剂，导致回收率偏低， 建议使用 PTFE 水系针式过滤器。4）在检测赤藓红时，需要注意在使用离心管氮吹时会有少量的赤藓红会附着在离心管上，可以采用涡旋和 超声的方法进行溶解，使用玻璃的氮吹管更易溶解；或者在溶解的时候加入一定量的甲醇便于赤藓红的溶解。
