HPLC分析条件的筛选主要包括以下步骤:
1. 确定目标化合物性质。需要了解待分离杂质的一些性质,包括分子量、结构式(主要看有哪种基团)等,并预测该种物质在哪种有机溶剂中易容。根据结构式可以大致预测分子极性大小,同时也可以判断该物质是否容易水解。
2. 根据目标化合物的性质,结合杂质在各种常见洗脱溶剂中的溶解性,例如在甲醇、乙腈、正己烷中哪个比较易溶,从而选择适合用于洗脱的有机流动相,确定方法开发时是用正相色谱柱还是反向色谱柱。
3. 在总量为m样品中加入质量为mS的内标物S,然后根据被测物和内标物的重量以及在色谱图上相应的峰面积比求出某组分i的含量。这种方法不需所有组分都出峰,操作条件和进样量基本无影响。
以上步骤完成后,可以进一步确定HPLC分析的实验参数,包括流动相的组成及其比例、流速、检测波长等。以上条件可根据文献资料了解或经验总结,若无相关经验可参考,可进行实验设计筛选实验条件,通过实验结果不断优化分析条件。同时注意内标物难找,需要稳定无反应、结构性能相似、保留时间内插并完全分离。
希望以上HPLC分析条件筛选的步骤对你有所帮助。