液相色谱柱的平衡方法主要包括以下步骤:
1. 选择合适的流动相:对于反相色谱柱,应选择纯乙腈或甲醇作为流动相,确保流动相和乙腈-水互溶。如果流动相中含有缓冲盐,需先用20倍柱体积的5%的乙腈-水流动相进行“过渡”,然后使用分析样品的流动相直至得到稳定的基线。
2. 低流速平衡:首先,用低流速0.2ml/min将色谱柱平衡过夜,这样可以将色谱柱的填料充分平衡至较佳状态,以保证色谱柱的使用寿命,并确保在以后的使用中获得分析结果的重现性。
3. 升高流速:然后,将流速升高到0.8mL/min冲洗30分钟,以便将色谱柱的填料充分平衡至最佳状态,这样可以保证色谱柱的使用寿命,并且保证在以后的使用中获得分析结果的重现性。平衡过程中,将流速缓慢地提高直到获得稳定的基线。