制备色谱柱时应遵循以下原则:
1. 选择适合的柱材料:根据分离物性质和分析要求,选择合适的柱材料,如硅胶、碳链物质、液相材料等。
2. 选择适合的填充物:根据分析目标和柱的类型,选择合适的填充物,如硅胶、高效液相色谱固定相、气相色谱固定相等。填充物应具有良好的稳定性和分离性能。
3. 良好的柱内均匀度:填充物在柱内应均匀分布,避免存在空隙或不均匀堆积,确保分离效果和重现性。
4. 适当的填充压实度:填充物填充的密度和压实度要适中,过度压实会增加柱内压力,影响流动相的通过,不足压实则会导致柱内流速过快或出现漏洞。
5. 避免柱内污染:制备色谱柱时要保证工作环境的清洁,避免柱内污染物的存在,尽量减少杂质和异物的进入。
6. 适当的固化处理:根据填充物的性质和柱的类型,选择适当的固化处理方法,如加热固化、光照固化等,确保填充物固定在柱内壁上。
7. 质量控制和测试:制备完成后,应进行质量控制和测试,如测试柱的压力和流速性能,并进行性能测试,如分离效果和重现性等。
8. 合理的柱存储和保养:制备好的色谱柱应妥善存储,避免受到湿气、高温或其他有害因素的影响。在使用过程中,定期进行洗涤、再生、补充填充物等保养操作以延长柱的使用寿命。
总之,制备色谱柱应综合考虑分析目标、柱的类型、填充物的选择以及柱内均匀度等因素,遵循制备原则并进行质量控制,以保证色谱柱的分离效果和重现性。