App ID: FLM-T230006
方法:自订
色谱柱:Titank HILIC 3μ 150×4.6mm(货号:FMF-5567-EON)
流动相:10mM 磷酸二氢钾(pH 4.3)-乙腈=(20:80)
流速:0.6ml/min
检测波长:205nm
柱温:45℃
方法说明:使用 Titank HILIC 色谱柱可较好分离左卡尼汀及杂质 A,注意流动相采用高比例乙腈,而磷酸盐在高比例乙腈中易盐析,流动相应采用预混,不可采用在线混合。
-
手性色谱柱的选择:由于左卡尼汀为手性分子,其杂质A也是手性的,因此需要使用手性色谱柱对其进行分离。常见的手性色谱柱有手性固定相型与手性填充剂型两种,根据实际需要选择合适的手性柱。
-
流动相的优化:流动相的组成及pH对于手性化合物的分离效果有很大影响。需要通过试错法进行调整,根据试验结果优化流动相的成分及pH值。流动相通常由有机溶剂(如甲醇、乙腈等)和缓冲液组成。
-
柱温的控制:柱温的升高有助于提高柱效和分离效率,但对于左卡尼汀和其杂质A,温度过高会导致两者失活,因此需要在不影响分离效果的前提下,控制好柱温,一般为室温或略高于室温。
-
检测方法的选择:由于左卡尼汀和杂质A在纯水中不易被检测到,因此需要选择合适的检测方法,如紫外检测、荧光检测、电化学检测等,以提高检测的灵敏度和准确性。同时,需要确保检测方法与色谱柱相兼容。
-
样品预处理:对于液体样品,需要通过净化或者液液抽提等方式来去除样品中的杂质,使得左卡尼汀和其杂质A的含量大致相等。对于固体样品,需要进行适当的提取、萃取或者洗脱等处理,使得样品中的化合物含量处于相同的数量级。
以上是左卡尼汀及其杂质A的色谱分离方法的关键要点,实际操作过程中需要根据具体情况做出适当调整。