App ID: FLM-T230008
方法:自定
色谱柱:Titank HILIC 5μ 250*4.6mm(货号:FMG-5568-EONU)
流速:1.0 mL/min
柱温:35℃
检测器:UV 195nm
流动相: 乙腈-20mM 磷酸氢二钾(pH7.5)=(70:30)
图谱
方法说明:原方法使用氨基柱在该流动相下进行分析,但氨基柱普遍损耗都较大;上述方法改用 Titank HILIC
色谱柱替代原先的氨基柱,其分析效果也较好,该柱的稳定性及寿命均相对于氨基柱好。
1. 试剂及设备
硫酸氨基葡萄糖试剂盒、离心机、比色皿、移液器、吸管、去离子水等。
2. 样品制备
将待测样品溶解在去离子水或缓冲液中。
3. 操作步骤
(1) 取一支试管,加入5μl待测样品和1ml硫酸氨基葡萄糖试剂,混匀,室温下静置10分钟,使产生的颜色稳定;
(2) 在比色皿中加入1ml去离子水,校零,记录比色皿编号;
(3) 将试管离心,离心3000rpm,2分钟;
(4) 用移液器取离心后上清样液,吸至0.2mg/ml线,放入对应的比色皿中,注意避免气泡;
(5) 使用比色镜或分光光度计,在546nm(或者530nm)波长下读取吸光度(A);
(6) 按照试剂盒附带的说明书计算样品中硫酸氨基葡萄糖的含量。
4. 注意事项
(1) 确保所有勾兑操作在10分钟内完成;
(2) 离心后,只取上清液测定,避免样品残留;
(3) 操作过程中,禁止口试,严格遵守实验室有关安全规定。