猪肉中喹诺酮类药物的测定-固相萃取法+LC-MS检测
本方案建立了以C18固相萃取柱(货号：9B-T001-06500，描述：SuperClean C18 500mg/6ml, 30支/包)对猪肉样品中4种喹诺酮类药物萃取净化方法，进行低中高三水平基质加标，都能获得满意的实验结果，回收率介于84%~115%之间，RSD值小于10 %。
一、样品提取
准确称取粉碎均匀的猪肉样品2.0 g于干净离心管中，加入10 mL 5%甲酸乙腈溶液，再加入1 g NaCl，2500 r/min涡旋提取10 min，8000 r/min离心2 min，取上清液5 mL氮吹近干，用5 mL 5 %甲酸水溶液复溶，待净化。
二、样品净化
活化：5 mL甲醇，5 mL水 上样：上述待净化液 淋洗：5 mL 10 %甲醇水
洗脱：5 mL 10 %氨水甲醇收集洗脱液，氮吹近干，初始流动相复溶，上机。
三、基质标准曲线溶液的制备
选同类型空白猪肉样品，按上述前处理方法进行操作，取适量的标液配制成合适浓度的基质曲线。
四、仪器条件
（1）色谱条件
仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TSQ Endura）
色谱柱：菲罗门 Titank C18 3 μm 50*2.1 mm(货号：FMB-5559-BONU)
流动相：A：水（0.1 %甲酸） B：甲醇（0.1 %甲酸）
洗脱方式：梯度洗脱，见表1
流速：0.3 mL/min
柱温：30℃
进样量：5 μL
表1 梯度洗脱程序
|
时间/min |
A/% |
B/% |
|
0.00 |
98 |
2 |
|
0.25 |
98 |
2 |
|
2.00 |
70 |
30 |
|
4.00 |
70 |
30 |
|
4.20 |
30 |
70 |
|
6.20 |
30 |
70 |
|
6.50 |
2 |
98 |
|
7.80 |
2 |
98 |
|
8.00 |
98 |
2 |
|
10.00 |
98 |
2 |
（2）质谱条件
离子源：HESI
电喷雾电压：3500 V
鞘气压力：40 arb
辅气压力：2 arb
离子传输管：380 ℃
辅气温度：350 ℃
表2 组分名称、保留时间及特征离子一览表（*为定量离子）
|
序号 |
名称 |
保留时间/min |
母离子 |
子离子 |
|
1 |
马波沙星 |
3.20 |
363.1 |
320.0*、342.0 |
|
2 |
培氟沙星 |
3.48 |
334.2 |
290.1*、316.1 |
|
3 |
达氟沙星 |
3.92 |
358.2 |
314.1、340.0* |
|
4 |
二氟沙星 |
4.24 |
400.2 |
299.0、356.1* |
五、实验结果
表3 4种喹诺酮类加标回收实验结果
|
目标物 |
10.0 μg/kg |
20.0 μg/kg |
50.0 μg/kg |
||||
|
回收率 （%） |
RSD（%） n=3 |
回收率 （%） |
RSD（%） n=3 |
回收率 （%） |
RSD（%） n=3 |
||
|
马波沙星 |
88.8 |
8.04 |
107 |
2.72 |
90.7 |
6.19 |
|
|
培氟沙星 |
84.2 |
8.63 |
94.5 |
8.79 |
85.7 |
2.29 |
|
|
达氟沙星 |
90.9 |
7.94 |
115 |
6.17 |
96.8 |
6.25 |
|
|
二氟沙星 |
91.7 |
7.89 |
107 |
5.29 |
94.4 |
5.01 |
|
猪肉中喹诺酮类药物的测定-固相萃取法+LC-MS检测
图1 添加水平为50.0 μg/kg时4种喹诺酮类的总离子流图
