Comixsil和Comixshell系列色谱柱使用说明书
菲罗门公司的Comixsil和Comixshell为创新的混合作用（Mixed-mode）液相色谱柱，通过在碳链上嵌入离子基团，可以实现 在不同的流动相条件下提供离子交换/排阻、Hilic和疏水等作用，可以为大极性化合物和成分之间性质差异大的样品的分析提供新的解决方案。
为了延长Comixsil和Comixshell系列色谱柱的使用寿命，请仔细阅读以下操作要点：
一、色谱柱操作注意事项
1. 避免在Comixshell CARP、Comixsil ACRP、Comixsil RPAC、Comixsil HCS、Comixsil RP-100以及Comixsil RP-CX这几种固定相上使用醇类流动相，因为这可能与固定相发生酯化反应从而带来重现与保留的变化，即一般情况下流动相中的有机相只用乙腈，但不限制THF以及其它类溶剂在流动相中的添加使用；
2. 在使用Comixshell CARP、Comixsil ACRP、Comixsil RPAC、Comixsil HCS、Comixsil RP-100以及Comixsil RP-CX这几种固定相时，在连接色谱柱前需要先用不含醇的流动相冲洗管路，防止仪器体系中可能残存的醇类溶剂进入色谱柱；
3. 不要超出Comixsil和Comixshell系列色谱柱的pH范围使用（见要点四），这两个系列色谱柱需要始终保存在酸性的缓冲盐或含有酸的体系中；
4. 不能将色谱柱保存在含有TEA或TFA等调节剂的流动相中，这可能会造成色谱填料的改性而影响实验结果的重现；
5. 为了获得好的重现性，需要在进样前进行充分的柱平衡；
6. 为了获得好的重现性，强烈推荐使用柱温箱以维持色谱柱在运行过程中温度的稳定，所有Comixsil和Comixshell系列柱的温度范围是0~60 ℃；
7. Comixsil系列柱的最高耐受压力为5000 Psi（3 μm及5 μm产品），Comixshell系列柱的最高耐受压力为10000 Psi（2.7 μm 产品），任何时候不能超过这个压力，否则可能会造成填料损坏或漏液；
8. 一般情况下色谱柱必须按照标签的方向指示运行。如果有必要对色谱柱进行反冲去除筛板和柱头污染的话，必须将流速降至0.1 ml/min 进行清洗（清洗方法见要点三）；
9. 可以使用PEEK或金属接头连接色谱柱，为了降低柱外体积建议使用PEEK管路和PEEK手紧接头以达到最好的匹配。
二、色谱柱的平衡方法
配置一瓶浓度为100 mM 的甲酸铵溶液（pH 3.2）；
1. 新色谱柱第一次启用时，请使用乙腈：100 mM 甲酸铵（pH 3.2）= 75：25 冲洗至少20-30 个柱体积，直到基线平稳后再用方法中的流动相起始条件平衡后再进样；
2. 当使用中的色谱柱在含不同酸的流动相之间切换（如甲酸切换成 TFA）时，请使用乙腈：100 mM 甲酸铵（pH 3.2）= 75：25 过渡10 个柱体积；
3. 当使用中的色谱柱在含酸和铵盐（甲酸铵/乙酸铵）的流动相之间相互切换时，可以直接相互切换，但要注意平衡时间需要适当延长；
4. 当使用中的色谱柱在含不同的铵盐的流动相之间切换时，可以直接相互切换，但要注意平衡时间需要适当延长；
5. 当需要使用含磷酸盐的流动相时，请先用乙腈/100 mM 甲酸铵（pH 3.2）（比例随方法中的比例而定）平衡10 个柱体积，需要注意磷酸盐与乙腈的比例，防止盐析现象。
三、色谱柱清洗方法
1. 当色谱柱在反相混合模式使用时（即方法流动相中有机相比例较低时），可使用200 mM 甲酸铵 : 乙腈 = 30 : 70 或 700 mL 乙腈+300 mL 水+3 mL TFA 或磷酸作为流动相冲洗20-30 个柱体积；
2. 当色谱柱在HILIC 混合模式使用时（即方法流动相中有机相比例较高时），可使用100 mM 甲酸铵 : 乙腈 = 70 : 30 或300 mL 乙腈+700 mL 水+3 mL TFA 或磷酸作为流动相冲洗20-30 个柱体积。 建议在检测完样品后，先按照这个方法清洗色谱柱后再按要求保存（见要点四）。
四、色谱柱的pH 使用范围和保存条件
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色谱柱型号 |
pH 范围/建议操作范围 |
短期保存 |
长期保存 |
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Comixshell CARP |
1.5-7.5/2.0-6.5 |
20 mM 甲酸铵（pH 3.2）/乙腈=25/75 |
乙腈/水/甲酸=75/25/0.1 |
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Comixsil ACRP |
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Comixsil RP-CX Comixsil RP-100 Comixsil RPAC |
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Comixsil HCS |
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Comixshell AIRP |
1.5-6.0/2.0-5.0 |
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Comixsil RP-AX |
五、色谱柱键合的类型、存在的主要作用机制
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色谱柱型号 |
键合类型 |
存在的主要作用机制 |
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Comixshell CARP |
弱阴离子+疏水链 |
阳离子交换（阴离子排阻）+疏水+HILIC |
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Comixsil ACRP |
弱阴离子+弱阳离子+亲水链 |
阴/阳离子交换/排阻+HILIC |
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Comixsil RPAC |
弱阴离子+弱阳离子+疏水链 |
阴/阳离子交换/排阻+疏水 |
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Comixsil RP-CX |
弱阴离子+疏水链 |
阳离子交换（阴离子排阻）+疏水 |
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Comixsil RP-100 |
弱阴离子+疏水链 |
阳离子交换（阴离子排阻）+疏水+HILIC |
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Comixsil HCS |
弱阴离子+短疏水链 |
阳离子交换（阴离子排阻）+HILIC |
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Comixshell AIRP |
弱阳离子+疏水链 |
阴离子交换（阳离子排阻）+疏水 |
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Comixsil RP-AX |
弱阳离子+疏水链 |
阴离子交换（阳离子排阻）+疏水 |
