菲罗门色谱柱峰形拖尾的9个原因

流动相所用的各种溶剂至少是分析纯，尽量使用色谱纯试剂。

流动相所用的水要是超纯水或全玻璃器皿双蒸水。

用前先用0.45um溶剂微孔过滤(器)过滤，除去可能存在的微粒。

流动相建议现用现配，对于含盐的溶液尤其注意长置会产生细菌或出现沉淀。

此外还得保证储存流动相的容器清洁。

复杂样品可选用0.45um溶剂微孔过滤(器)或样品预处理柱对样品进行预处理，确保样品中不含微粒杂质。

若样品不便处理，要使用保护柱。

柱内填料污染时，可将柱头螺丝卸下，用专用工具挖出柱内前段被污染填料，再以相同的填料重新填入，修复。

或以能溶解污染物的流动相按色谱柱使用的相反方向，冲洗色谱柱(约20至30倍柱体积，或视具体情况而定；另外，此时不能接检测器)，将污染物冲出色谱柱，再按色谱柱标明的使用方向使用。
 

适当减小进样量或样品浓度(需要时，可提高检测器灵敏度)直至峰形和保留时间不再改变，便可消除这种不良影响。

减小进样量还能改善其分离度。正常情况下，样品中每种化合物在150×4.6mm柱中进样量保持在3～50ug范围内，不会引起明显超载。
 

柱外效应(即进样阀、色谱柱及检测器间的管路过长、直径过粗、管路接头不匹配、有死体积)是影响色谱柱柱效的主要因素之一。

所以在可能的条件下，色谱柱的两端连接管路要尽可能短，连接管内径尽可能细小，切口务必平整光滑，尽可能的减小死体积，以防止因样品扩散造成不能反映色谱柱真实柱效等情况发生。
 

仔细分析色谱柱内填料表面性质可知：反相色谱柱填料的表面大约被键合相覆盖了一半，其余的就是未被键合的硅醇基团。

所谓的保留是指样品分子与键合相相互作用的结果。

但是，酸性或碱性化合物与硅胶表面残存的硅醇基团或金属杂质之间相互作用而引起双重保留机理，因此，发生了峰形拖尾。

为了减小峰形拖尾，通常可在流动相加入25mM三乙胺(抑制剂)。三乙胺能与硅醇基团发生强烈的相互作用，从而降低或阻断样品分子与硅醇基团的作用，以保证保留机理正常进行，并大大缓解了峰形拖尾。使用长链的硅醇基抑制剂，虽起效较慢，但持续力较三乙胺长。

因为抑制剂分子中除了胺基与硅醇基团发生极性作用外，大分子中非极性部分与固定相也会发生反相作用而产生保留现象。如果将抑制剂加至样品中，效果会显著。
 

柱内金属污染(Fe，Ni等)可引起某引些化合物峰形拖尾。金属可由填料本身带进，也可由腐蚀性流动相缓慢溶解柱进口的金属滤片，随流动相沉积到柱填料中。

例如C18柱填料被金属污染后，造成酸性/碱性样品拖尾，可用碱洗/酸洗后再键合的填料，得到的峰是尖锐且对称的。