高效液相色谱柱会经常遇到以下五个问题：
1.液相色谱柱柱压问题
柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。
1.1压力过高：
这是高效液相色谱在使用中非常常见的问题，指的是压力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。
此时，我们应该分段进行检查：
(1)首先断开真空泵的入口处，此时，PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果，液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。
处理方法：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，再检查;
(2)打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。
处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。如果压力降至100PSI(6.7Bar)以下，过滤白头正常，再检查;
(3)把液相色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。
处理方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。
假如，按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗液相色谱柱。
这时，如果色谱柱柱压仍不下降，只有换色谱柱柱子入口筛板，但是，一旦操作不甚，很容易造成色谱柱柱效下降，所以，尽量少用。
1.2压力过低
压力过低的现象一般是由于系统泄漏
处理方法：寻找各个接口处，特别是色谱柱两端的接口，把泄漏的地方旋紧即可。当然，还有一个原因就是泵里进了空气，但此时表现的往往是压力不稳，忽高忽低，更严重一点会导致泵无法吸上液体。
处理方法：打开Purge阀，用3～5mL/min的流速冲洗，如果不行，则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。
2.漂移问题主要包括基线漂移和保留时间漂移。
2.1液相色谱基线漂移
一般说来，液相色谱仪刚起动时，基线容易漂移，大概要半个小时的平衡时间，如果，你用了缓冲溶液或缓冲盐，还有就是在低波长下(220nm)平衡时间相对会比较长，但是，如果你在实验过程中发现基线漂移，则你要考虑下面的原因：
①紫外灯能量不足。
解决方法：更换新的紫外灯;
②柱温波动。
解决方法：控制好柱子和流动相的温度，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。
③流通池被污染或有气体。
解决方法：用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用盐酸)。
④流动相污染、变质或由低品质溶剂配成。
解决方法：检查流动相的组成，使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。
⑤样品中有强保留的物质(高K'值)以馒头峰样被洗脱出，从而，表现出一个逐步升高的基线。
解决方法：使用保护柱，如有必要，在进样之间。在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。
⑥检测器没有设定在吸收波长处。
解决方法：将波长调整至吸收波长处;
⑦流动相的pH值没有调节好。
解决方法：加适量的酸或碱调至pH值;
2.2保留时间漂移
保留时间重现是液相性能好坏的一个重要标志，同一种东西，两次的保留时间相差不要超过15s，超过了半分钟可看做保留时间漂移，就无法进行定性，你要考虑以下原因：
①温控不当。
解决方法：调好柱温，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。
②流动相比例变化。
解决方法：检查四元泵的比例阀是否有故障。
③色谱柱没有平衡。
解决方法：在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。
④流速变化。
解决方法：重新设定流速。
⑤泵中有气泡。
解决方法：从泵中除去气泡。
2.3峰型异常问题
峰型问题是液相的主要问题，在做液相过程中，我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型，对于各种各样的异常峰，要区别对待，从主要问题出发，一个一个加以解决。
①所有峰均为宽峰。
解决方法：系统未达到平衡;
溶解样品的溶剂极性比流动相差很多;
色谱柱尺寸及类型选择不正确;
色谱柱或保护柱被污染或柱效降低;
温度变化造成的影响。
②所出峰比预想的小。
解决方法：样品黏度过大;进样品故障或进样体积误差;检测器设置不正确，定量环体积不正确;检测池污染;检测器灯出现问题。
③色谱图中未出峰。
解决方法：系统未进样或样品分解;
泵未输液或流动相使用不正确;
检测器设置不正确;
针对以上情况成因作相应调整即可。
④一个峰或几个峰是负峰。
解决方法：流动相吸收本底高;进样过程中进入空气;样品组分的吸收低于流动相。
⑤所有峰均为负峰。
解决方法：信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒;
光学装置尚未达到平衡。
⑥出现双峰或肩峰。
解决方法：进样量过大;样品浓度过高;
保护柱或色谱柱柱头堵塞;
保护拄或色谱柱污染或失效;
柱塌陷或形成短通道。
⑦前伸峰。
解决方法：进样量或样品浓度高;
溶解样品的溶剂较流动。
